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初級(jí)會(huì)員 | 第10年

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基于比色度/熒光性的蛋白定量方法(總蛋白質(zhì)/肽含量)

時(shí)間：2024/8/21
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　　基于比色度/熒光性的蛋白定量方法(總蛋白質(zhì)/肽含量)：
 
　　一、BCA法(測(cè)定范圍：5~2000 pg/ml)：基于比色度的蛋白定量方法
 
　　原理
 
　　蛋白質(zhì)分子中的肽鍵在堿性條件下能與Cu2+絡(luò)合生成絡(luò)合物,同時(shí)將Cu2+還原成Cu+。二喹啉甲酸及其鈉鹽是一種溶于水的化合物，在堿性條件下，可以和Cu+結(jié)合生成深紫色的化合物，這種穩(wěn)定的化合物在562nm處具有強(qiáng)吸收值，并且化合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比。故可用比色的方法確定蛋白質(zhì)的含量。
 
　　操作步驟
 
　　1、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
 
　　以牛血清白蛋白含量為橫坐標(biāo)，以吸光值為縱坐標(biāo)。
 
　　2、樣品測(cè)定
 
　　向樣品中加入BCA試劑，搖勻，于37℃保溫30min，冷卻至室溫后在595nm處比色。
 
　　3、根據(jù)樣品的吸光值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品的蛋白質(zhì)含量。

 

 
　　樣品測(cè)定濃度范圍：在5~2000 ug/ml
 
　　標(biāo)準(zhǔn)方案：37°C，30分鐘(檢測(cè)范圍=20-2000ugmL)
 
　　室溫方案：室溫，2小時(shí)(檢測(cè)范圍=20-2000ug'mL)
 
　　增強(qiáng)方案：60°C，30分鐘(檢測(cè)范用=5-250mg/mL)

 

 
　　二、Qubit® 法(測(cè)定范圍：12.5 μg/mL~5mg/mL)：基于熒光性的蛋白定量方法
 
　　原理
 
　　Qubit@ 分析試劑盒測(cè)定樣品中的可溶性蛋白?？繜晒馊玖吓c蛋白質(zhì)特意結(jié)合后發(fā)出熒光，再檢測(cè)產(chǎn)生熒光量的多少來(lái)定量。這個(gè)方法能把蛋白質(zhì)與DNA、RNA、降解核酸、游離核苷酸及其它雜質(zhì)區(qū)分開(kāi)采用。
 
　　操作流程
 
　　1、建立標(biāo)準(zhǔn)曲線----樣品處理---讀取分析數(shù)據(jù)；
 
　　2、Qubit® 分析試劑盒，能精確定量樣品初始濃度范圍為:12.5 ug/mL~5mg/mL的蛋白質(zhì)樣本。

 

 

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