ELISA檢測(cè)，按照試劑說(shuō)明書要求，每次試驗(yàn)、每塊扳上都要設(shè)置以下3項(xiàng)對(duì)照和用途：  
1．空白對(duì)照：

僅用稀釋液代替檢測(cè)樣本、用以觀測(cè)最終反應(yīng)的顯色“本底"、并用于酶標(biāo)儀消除、扣除“本底"，即：以本底為“零"讀取陽(yáng)性、陰性對(duì)照孔和樣本檢測(cè)孔的吸光值（A）；或者，在計(jì)算陰性對(duì)照均值（NCx）、陽(yáng)性對(duì)照均值（PCx）、樣本讀數(shù)的S/C.O.值時(shí)減去空白對(duì)照的本底吸光值。早年的酶標(biāo)儀無(wú)自動(dòng)扣除空白對(duì)照孔讀數(shù)功能，這種酶標(biāo)議現(xiàn)已淘汰不用了，寫上這段話的意思是補(bǔ)充說(shuō)明設(shè)置空白對(duì)照的用途?？瞻卓拙唧w如何讀取讀數(shù)，則依照說(shuō)明書操作。例如，生物梅里埃中國(guó)有限公司的中文版《人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）使用說(shuō)明書》上提示：以空氣讀空白（不放板架和板條），在450nm（單波長(zhǎng)）、或450nm和620—700mn（底物是TMB）參考波長(zhǎng)進(jìn)行讀數(shù)。
2．陰性對(duì)照（品）：
（1）、陰性對(duì)照（品）的概念與要求：

所謂陰性對(duì)照（品），應(yīng)當(dāng)是本項(xiàng)檢測(cè)試驗(yàn)中采用與待撿物（樣品、人用試劑就是人的血清等）具有同源性和同質(zhì)性，又不含有待檢物質(zhì)，并能客觀比較和鑒別處理因素（血清免疫學(xué)試驗(yàn)中有特異性抗原與抗體反應(yīng)）之間的差異。因此，用動(dòng)物血清或其制品（如牛血清白蛋白等）代替陰性人血清作為對(duì)照品，從理論和實(shí)踐上都是不可取的，弊端甚多，無(wú)須細(xì)述。注意：據(jù)我所知，國(guó)產(chǎn)ELISA試劑中，有的廠牌是用動(dòng)物血清制品稀釋配置、或與部分人血清混合配置的；其二，陰性對(duì)照讀數(shù)，并非是“越低越好"。NCx值接近0.00X水平，這是假象！試想一下，真正采用“陰性人血清"的陰性對(duì)照品，NCx值會(huì)如此之低嗎？舉個(gè)例子，雅培乙肝六項(xiàng)EIA試劑的NCx值，分別為：0.010（HBsAg）、0.027（抗—HBs）、0.035（HBeAg）、1.083（抗—HBe）、1.065（抗—HBc）、0.045（抗HBc-IgM）。生物梅里埃的HIV試劑NCx是0.091。辨別試劑NCx值是否合理的一個(gè)很簡(jiǎn)單的方法，只要對(duì)比大量陰性樣本的實(shí)際讀數(shù)就“一目了然"啦！
一個(gè)題外插曲：表明ELISA試劑內(nèi)在質(zhì)量的一個(gè)重要統(tǒng)計(jì)標(biāo)志，就是要看：陰性樣本的的上限不應(yīng)當(dāng)大于、必須小于C.O.I.=1.00；反之，陽(yáng)性樣本的的下限不可小于、應(yīng)當(dāng)大于C.O.I.=1.00！早年我用SPSS軟件輸出阿克蘇HIV和國(guó)產(chǎn)甲、乙試劑檢測(cè)600例左右的健康人體檢血清的三幅直方圖，可以表明陰性樣本的不同分布特征，頗有意思。  
我為什么要如此細(xì)說(shuō)NCx呢？因?yàn)镹Cx值在Cut off值計(jì)算中是相當(dāng)舉足輕重的（詳后）。

（2）、陰性對(duì)照（品）分為兩類
一是代表受檢人血清中并不含有、或方法學(xué)靈敏度未能檢出的待檢物的基準(zhǔn)水平，并且是結(jié)果判斷值（Cut off）計(jì)算式中決定“是"（陽(yáng)性）、或“否"（陰性）的唯 1可變值。陰性對(duì)照值高，導(dǎo)致假陰性；反之，導(dǎo)致假陽(yáng)性。如：HBsAg、HBeAg、抗—HBc等。二是陰性對(duì)照設(shè)置，在方法學(xué)上要求加入指示性定量標(biāo)準(zhǔn)品，如中和劑HBeAg，定量HBcAg等，用以檢測(cè)抗—HBe、抗—HBc?；蛘撸x取代表平均水平的正常人血清用作陰性對(duì)照，如檢測(cè)抗—HBc IgM。此類Cut off 值計(jì)算時(shí)，多數(shù)均包括陰性和陽(yáng)性對(duì)照值2個(gè)可變值。

3．陽(yáng)性對(duì)照（品）：
（1）、陽(yáng)性對(duì)照（品）的概念與要求：

同陰性對(duì)照（品），只是采用“精選"的含有待檢物質(zhì)的人血清制備而成。所謂“精選"，就是把收集的陽(yáng)性人血清經(jīng)過(guò)數(shù)種試驗(yàn)進(jìn)行“篩試"、把含有“干擾性物質(zhì)"的血清剔除、不用，以避免出現(xiàn)“假陽(yáng)性"干擾試驗(yàn)結(jié)果。  
（2）、陽(yáng)性對(duì)照（品）設(shè)置，也可區(qū)分為兩種類型與用途：
一是陽(yáng)性對(duì)照主要用于評(píng)價(jià)該項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果是否有效和試驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性與可比性。而所設(shè)的陽(yáng)性對(duì)照的測(cè)量值不列入Cut off值計(jì)算、但是不可不做。如HBsAg、抗—HBs、HBeAg等。
二是陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置，不僅用于評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果是否有效和試驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性與可比性，而且計(jì)入Cut off的計(jì)算。此時(shí)的Cut off值的含義是代表該標(biāo)志物在健康（正常）人群中正常值范圍的上限。待檢樣本檢測(cè)值超過(guò)該上限（Cut off）時(shí)表示有診斷意義。例如抗—HBe、抗—HBc、抗—HBc IgM等。