紅色熒光標(biāo)記人源低密度脂蛋白500μg 

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

低密度脂蛋白（Low Density Lipoprotein，簡(jiǎn)稱為L(zhǎng)DL）是通過(guò)脂蛋白酯酶的水解作用，脫去極低密度脂蛋白（VLDL）中的甘油三脂，釋放游離脂肪酸轉(zhuǎn)化而來(lái)的。因甘油三酯的去除使得所占比例提高，增加顆粒本身密度，從而得到LDL。LDL與脊椎細(xì)胞表面的受體特異性結(jié)合，然后通過(guò)受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用將運(yùn)輸?shù)饺砀魈幖?xì)胞。因此，LDL可以用來(lái)研究受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用過(guò)程，尤其是在動(dòng)脈粥樣硬化等疾病中，血漿來(lái)源的LDL還可用于研究LDL在功能和代謝中的氧化作用。紅色熒光標(biāo)記人源低密度脂蛋白（Human  DiI-LDL）是標(biāo)記熒光探針Dil（1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-  tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate）的LDL，可以用來(lái)觀察培養(yǎng)細(xì)胞的LDL結(jié)合位點(diǎn)，或篩選LDL受體表達(dá)缺陷型細(xì)胞突變株。也可以通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)評(píng)估細(xì)胞受體水平，或檢測(cè)組織內(nèi)的受體水平。  DiI-LDL是研究細(xì)胞內(nèi)吞作用非常好的標(biāo)記物。

Human DiI-LDL為無(wú)菌包裝，可以直接稀釋使用。除提供DiI-LDL，我們還提供不帶標(biāo)記的LDL，以及修飾化的LDL如乙?；疞DL（Ac-LDL），以及氧化修飾的LDL（Ox-LDL）。

制備方法

      純化的人健康血漿來(lái)源的LDL直接標(biāo)記上DiI熒光探針，然后通過(guò)超速離心以及透析的方法純化回收標(biāo)記產(chǎn)物，并濾膜過(guò)濾除菌。純化的DiI-LDL溶于含0.02 mM EDTA的PBS，pH 7.4中。

產(chǎn)品性質(zhì)

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸；

4C無(wú)菌避光，收到貨后可穩(wěn)定保存6周。千萬(wàn)不可凍存！使用時(shí)一定要無(wú)菌操作！

注意事項(xiàng)

1）本品的稀釋工作液極不穩(wěn)定，建議即配即用；

2）長(zhǎng)期貯存可能會(huì)有沉淀析出，屬于正常現(xiàn)象，低速離心2 min去除沉淀即可使用；

3）LDL與LDL受體的結(jié)合需要Ca2+和Mn2+的參與，過(guò)量EDTA的存在會(huì)抑制其結(jié)合；

4）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操。

5)  本產(chǎn)品僅作科研用途!

操作步驟

1）工作液制備：無(wú)菌條件下，將DiI-LDL用細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋至20-40 g/ml。

2）細(xì)胞準(zhǔn)備：吸除培養(yǎng)板內(nèi)培養(yǎng)基，向活細(xì)胞內(nèi)加入上述LDL，37℃培養(yǎng)4-5小時(shí)。

3）孵育結(jié)束，吸去含有Human DiI-Ox-LDL的培養(yǎng)基，并用無(wú)探針的培養(yǎng)基洗幾次。

4）根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

a）熒光顯微鏡觀察

采用標(biāo)準(zhǔn)的羅丹明激發(fā)：發(fā)射濾光片（或建議使用波長(zhǎng)為：Ex/Em=549nm/565nm）；若需要請(qǐng)使用含3%甲醛的PBS進(jìn)行固定，切勿使用甲醇或丙酮固定，因Dil易溶于有機(jī)溶劑。注：需設(shè)陽(yáng)性細(xì)胞以做對(duì)照。

b）細(xì)胞分選（流式細(xì)胞術(shù)）

處理細(xì)胞或者加入EDTA制成單細(xì)胞懸液，選用合適的已標(biāo)記純化細(xì)胞用作陰性和陽(yáng)性對(duì)照，從而進(jìn)行流式分選設(shè)門（gate）。（建議使用波長(zhǎng)為Ex: 488/514/549nm; Em: 565nm）。

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