從樣本采集到結(jié)果分析：非洲豬瘟病毒DNA檢測方案的工作流程@2024全國包郵BK-PCR16，山東博科儀器廠家介紹，非洲豬瘟(ASF)是豬只的一種嚴(yán)重病毒性疾病，準(zhǔn)確檢測其病毒DNA對(duì)防控疫情至關(guān)重要。以下是從樣本采集到結(jié)果分析的詳細(xì)工作流程：
1. 樣本采集
采樣準(zhǔn)備：
工具和材料：準(zhǔn)備無菌采樣管、手套、消毒液等。確保所有工具和材料均為無菌，以避免交叉污染。
個(gè)人防護(hù)：穿戴個(gè)人防護(hù)裝備(如口罩、實(shí)驗(yàn)服、手套)以保護(hù)自身和樣本。
樣本類型：
血液：通常從豬只的耳靜脈或其他部位采血。
組織：如淋巴結(jié)、脾臟等部位的組織樣本。
其他：也可采集糞便或唾液樣本，但血液和組織樣本更為常用。
采樣步驟：
使用無菌針頭從豬體內(nèi)取血樣，或用無菌工具取組織樣本。
將樣本放入標(biāo)記好的采樣管中，并立即標(biāo)記樣本信息(如采樣時(shí)間、地點(diǎn)、豬只編號(hào)等)。
將樣本立即置于冷藏條件下(通常為4°C)，以維持樣本的穩(wěn)定性，并盡快送至實(shí)驗(yàn)室。
2. 樣本處理
樣本預(yù)處理：
血液樣本：通常需要離心以分離血清或血漿。設(shè)置離心機(jī)至適當(dāng)速度和時(shí)間，分離血清后進(jìn)行處理。
組織樣本：將組織樣本進(jìn)行勻漿化，并通過離心去除不溶物。
其他樣本：如唾液或糞便樣本，需要進(jìn)行適當(dāng)?shù)念A(yù)處理和稀釋。
病毒提?。?/p>
使用專用的病毒提取試劑盒從樣本中提取非洲豬瘟病毒DNA。提取步驟通常包括樣本裂解、去除雜質(zhì)、結(jié)合DNA于提取柱中、洗脫等。
操作過程中確保在潔凈環(huán)境中進(jìn)行，以防交叉污染。使用無菌工具和試劑。
3. PCR反應(yīng)準(zhǔn)備
反應(yīng)混合物配制：
成分：PCR反應(yīng)液包括引物、探針、PCR緩沖液、DNA聚合酶和熒光染料。引物和探針需特異性識(shí)別非洲豬瘟病毒的DNA序列。
配制步驟：在無菌環(huán)境下配制反應(yīng)液，確保各反應(yīng)管中反應(yīng)液成分量一致。
PCR管裝載：
將提取的病毒DNA加入PCR管中，并加入配制好的反應(yīng)液。
輕輕混合反應(yīng)液，避免產(chǎn)生氣泡。
4. 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測
儀器設(shè)置：
程序設(shè)置：在PCR儀器中設(shè)置適當(dāng)?shù)臒嵫h(huán)程序，包括初始變性、變性、退火和延伸階段的溫度和時(shí)間。
樣本加載：將裝有PCR反應(yīng)混合物的PCR管放入儀器的反應(yīng)槽中。
實(shí)時(shí)監(jiān)測：
PCR儀器通過監(jiān)測擴(kuò)增過程中的熒光信號(hào)變化，實(shí)時(shí)記錄信號(hào)強(qiáng)度。熒光信號(hào)強(qiáng)度與樣本中的病毒量成正比。
儀器自動(dòng)生成擴(kuò)增曲線和Ct值(循環(huán)閾值)，顯示樣本中病毒DNA的濃度。
5. 結(jié)果分析
數(shù)據(jù)解讀：
Ct值分析：根據(jù)Ct值判斷樣本是否為陽性。Ct值低于設(shè)定閾值通常表示病毒存在。閾值設(shè)定可能因?qū)嶒?yàn)室而異。
標(biāo)準(zhǔn)曲線：對(duì)于定量PCR，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線將Ct值轉(zhuǎn)換為病毒量，評(píng)估感染程度。
結(jié)果確認(rèn)：
對(duì)陽性結(jié)果進(jìn)行確認(rèn)測試，以確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確。
記錄每個(gè)樣本的檢測結(jié)果和相關(guān)數(shù)據(jù)，確保信息完整。
6. 生成報(bào)告與后續(xù)措施
報(bào)告生成：生成包含樣本信息、檢測結(jié)果和數(shù)據(jù)分析的詳細(xì)報(bào)告。報(bào)告需清晰、準(zhǔn)確，并及時(shí)傳達(dá)給相關(guān)人員。
后續(xù)措施：根據(jù)檢測結(jié)果，采取相應(yīng)的防控措施，如陽性樣本需進(jìn)一步確認(rèn)，并實(shí)施隔離或處理措施。
通過以上步驟，能夠確保非洲豬瘟病毒DNA檢測的準(zhǔn)確性和有效性，為控制和防治豬瘟提供可靠依據(jù)。
