(1)營(yíng)養(yǎng)需求

·氨基酸----12種必須氨基酸(纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸、賴氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、組氨酸、酪氨酸、精氨酸、半胱氨酸)；10種非必須氨基酸；此外還需要谷氨酰胺，它在細(xì)胞代謝過(guò)程中有重要作用，所含的氮是核酸中嘌呤和嘧啶合成的來(lái)源，同樣也是合成三、二、一磷酸酰苷所需要的基本物質(zhì)。

·碳水化合物----糖類--葡萄糖；半乳糖；細(xì)胞對(duì)葡萄糖的吸收能力最高，半乳糖低。

·無(wú)機(jī)鹽----鈉、鉀、鎂、磷、鈣等；

·維生素----生物素、葉酸、核黃素、維生素C、維生素B12、吡哆醇等；

·蛋白質(zhì)與肽----白蛋白、抑肽酶、胎球蛋白、纖粘連蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、生長(zhǎng)因子；

·脂肪酸和脂類物質(zhì)----亞油酸、油酸、膽固醇等；

·微量元素----鐵、鋅、硒、銅、錳、鉬、釩等。

(2)溫度

常用的溫度是37°，但需要注意不同生物來(lái)源的組織細(xì)胞，最適宜的培養(yǎng)溫度是不同的，且細(xì)胞耐低溫，不耐高溫。在生理溫度范圍內(nèi)，溫度與細(xì)胞生長(zhǎng)率呈正相關(guān)。

(3)滲透壓

滲透壓的大小主要由培養(yǎng)基中各種鹽成分的濃度決定。細(xì)胞必須生活在與自身原生質(zhì)體等滲的環(huán)境中，若生存環(huán)境滲透壓高于自身，培養(yǎng)的細(xì)胞則有可能會(huì)面對(duì)脫水而亡，若生存環(huán)境滲透壓低于自身，培養(yǎng)的細(xì)胞則有可能面對(duì)吸水漲破而亡，但大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)滲透壓有一定耐受性。人血漿滲透壓290mOsm/kg, 可視為培養(yǎng)人體細(xì)胞的理想滲透壓。鼠細(xì)胞滲透壓在320mOsm/kg左右。對(duì)于培養(yǎng)大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞，控制培養(yǎng)基的滲透壓在260-320mOsm/kg的范圍為宜。

(4)氣相

體外細(xì)胞培養(yǎng)的氣相環(huán)境常由5% CO2與95%空氣構(gòu)成。其中O2參與細(xì)胞的能量代謝過(guò)程。CO2用于維持培養(yǎng)液的酸堿度。

(5) pH

適宜大多數(shù)細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)基pH在7.0-7.4之間，pH7.4的環(huán)境適合大多數(shù)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系。酚紅在培養(yǎng)基中被用來(lái)作為pH值的指示劑，用以持續(xù)監(jiān)測(cè)培養(yǎng)液的酸堿度，在低pH值時(shí)酚紅使培養(yǎng)液呈黃色，而較高的pH值時(shí)使培養(yǎng)液呈紫色，pH值7.2-7.4時(shí)為紅色，適合細(xì)胞培養(yǎng)。

(6)無(wú)毒無(wú)污染

無(wú)毒和無(wú)菌是體外培養(yǎng)細(xì)胞的前提條件。在活體的細(xì)胞的解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)，可抵抗微生物或其他有害物質(zhì)的入侵，但細(xì)胞在體外培養(yǎng)中，缺乏機(jī)體免疫系統(tǒng)的保護(hù)從而喪失對(duì)微生物的防御能力和對(duì)有害物質(zhì)的解毒能力。因此保證細(xì)胞的生長(zhǎng)環(huán)境的無(wú)毒無(wú)污染是細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件。在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程一定要注意防止有毒化學(xué)物質(zhì)污染、微生物污染、不同細(xì)胞間交叉污染。