產(chǎn)品信息
| 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 |
| Profusion™ DNA Polymerase 超高保真DNA聚合酶 | HRF0085 | 100 U |
| HRF0086 | 500 U | |
| HRF0087 | 1000 U |
產(chǎn)品描述
Profusion™ DNA Polymerase 是一款超高保真 DNA 聚合酶，其采用蛋白融合技術(shù)且具有通用引物退火功能。它是一款融合到持續(xù)合成能力增強(qiáng)域的火球菌屬樣校正 DNA 聚合酶，使 Profusion™ DNA 聚合酶產(chǎn)生具有高準(zhǔn)確度、靈敏度和抑制劑耐受性的 PCR 序列。 該酶具有 5’→3’DNA 聚合酶活性和 3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是 Taq DNA 聚合酶的 100倍。 酶溶液中添加了延伸因子使得該酶具有長片段擴(kuò)增能力，擴(kuò)增速度達(dá)到 15-30sec/kb ，擴(kuò)增目的片段的長度可長達(dá) 20 kb。本產(chǎn)品配備了優(yōu)化緩沖液，添加了 PCR 增強(qiáng)組分，使得該酶適用于復(fù)雜模板的擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端。
產(chǎn)品組分
| 組分名稱 | 規(guī)格 | ||
| HRF0085 | HRF0086 | HRF0087 | |
| （100 U） | （500 U） | （1000 U） | |
| Profusion™ DNA Polymerase (2 U/μL） | 50 μL | 250 μL | 250 μL×2 |
| 2×Profusion™ PCR buffer （含 Mg2+ ） | 1 mL×3 | 1 mL×15 | 1 mL×30 |
| 10mM dNTP | 100 μL | 500 μL | 1000 μL |
| 6×DNA loading buffer | 1 mL | 1 mL×5 | 1 mL×10 |
產(chǎn)品應(yīng)用
1.高保真 PCR
2.基因克隆
3.生成測序模板
4.高 GC 含量 PCR
5.長片段 PCR（長達(dá) 20 kb）
6.突變
7.高通量 PCR
活性定義
用活性化的大馬哈魚精子 DNA 為模板/引物， 74℃ ，30 min 內(nèi)，攝入 10 nmol 的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為 1 U。
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，有效期1年。
DNA Polymerase 超高保真DNA聚合酶
推薦PCR反應(yīng)體系（冰盒上配制）
| 組分 | 體積（μL） | 終濃度 |
| ddH2O | to 50 μL | - |
| 2×Profusion™ PCR buffer （含 Mg2+ ） | 25 μL | 1× |
| 10mM dNTP | 1uL | 0.2mM |
| DNA 模板 | 適量 | - |
| Primer 正向 (10 μM) | 2.5 μL | 0.5 μM |
| Primer 反向 (10 μM) | 2.5 μL | 0.5 μM |
| Profusion™ DNA Polymerase (2 U/μL) | 0.5 μL | 1 U/50 μL |
【注】
1）試劑使用：使用前請(qǐng)充分融解和混勻。
2）聚合酶濃度：推薦使用 1 U/50 μL，可以在 0.5-2 U/50 μL 之間進(jìn)行優(yōu)化，不要超過2 U/50 μL。
3）聚合酶添加：高保真酶有 3’→5’外切酶活性，可能會(huì)降解引物，配制反應(yīng)體系時(shí)，酶應(yīng)該在最后添加。
4）Mg2+終濃度： 體系終濃度為 1.5 mM。如有特殊需要，可用 50 mM MgCl2，以 0.2-0.5 mM 為間隔向上摸索。
5）高 GC 模板： 高GC含量的片段擴(kuò)增時(shí)，體系中加入終濃度為 3%的 DMSO 有利于擴(kuò)增，可明顯的提高擴(kuò)增的效率。
不同模板的推薦使用量（50 μL 反應(yīng)體系）：
| 模板種類 | 擴(kuò)增片段1kb-10kb |
| 基因組 DNA | 50 ng-250 ng |
| 質(zhì)?；虿《?DNA | 1pg-10 ng |
| cDNA | 1-5 μL (不超過 PCR 反應(yīng)總體積的10%) |
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