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原果膠含量試劑盒說明書

來源:齊一生物科技(上海)有限公司   2024年08月27日 15:59  
 
For Research Use only
僅供研究用
貨號:QYS-23098
微量法 100管/48樣
  注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
 
  原果膠含量測定意義
 
  果膠是植物細胞壁主要組成成分之一,分為水溶性果膠和不溶性果膠,即原果膠。因其具有良好的乳化、增稠和凝膠作用,在食品、紡織、印染、煙草、
 
  冶金等領域具有較廣泛的應用。
 
  原果膠含量測定原理
 
  原果膠在稀酸中水解為可溶性果膠,并進一步轉(zhuǎn)化為半乳糖醛酸,產(chǎn)物在強酸中與咔唑縮合生成紫紅色化合物,在 530 nm 處有特征吸收峰。
 
  原果膠含量試劑盒需自備的儀器和用品
 
  天平、研缽、常溫離心機、水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、濃硫酸和蒸餾水。
 
  試劑的組成和配制
 
  提取液一:液體 100mL×2 瓶,4℃保存。
 
  提取液二:液體 100mL×1 瓶,4℃保存。標準品:液體 1mL×1 支,4℃保存。
 
  試劑一:濃硫酸,自備。
 
  試劑二:液體 2mL×1 支,4℃保存。
 
  試劑三:液體 3mL×1 瓶,4℃避光保存。
 
  原果膠含量樣品處理
 
  將組織樣品搗碎,按照樣品質(zhì)量(g)和提取液一體積(mL)為 1: 20 的比列(建議取約 0.05g 樣
 
  品,加入 1mL 提取液一),置于 90℃恒溫水浴鍋中浸提 30min,取出冷卻后于 5000g、 25℃ 離心 10min,去掉上清,沉淀中再加入 1mL 提取液一重復操作一次,離心后去上清,沉淀中加入 1mL 提取液二,置于 90℃恒溫水浴鍋中水解 1h,取出冷卻后于 8000g、25℃離心15min,取上清液待測。
 
  原果膠含量測定操作表
 
  詳見說明書
 
  充分混勻,取 200μL 置于微量石英比色皿/96 孔板中,測定 530nm 處吸光值,分別記為 A1、A2、A3 和 A4。△A1=A2-A1,△A2=A4-A3
 
  注意:空白管和標準管只需測定一次。計算公式
 
  a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
 
  原果膠含量(mg /g 鮮重)= (C 標準×V 標) ×△A2÷△A1÷(W×V 樣÷V 樣總) = 0.25×△A2÷△ A1÷W
 
  C 標準:標準品濃度,0.25mg/mL;V 標:反應體系中加入標準品體積,0.02mL;V 樣:反應體系中加入樣本體積,0.02mL;V 樣總:加入提取液體積,
 
  1mL;W:樣本鮮重,g。
 
  b.用 96 孔板測定的計算公式如下
 
  原果膠含量(mg /g 鮮重)= (C 標準×V 標) ×△A2÷△A1÷(W×V 樣÷V 樣總) =0.25×△A2÷△ A1÷W
 
  C 標準:標準品濃度,0.25mg/mL;V 標:反應體系中加入標準品體積,0.02mL;V 樣:反應體系中加入樣本體積,0.02mL;V 樣總:加入提取液體積,
 
  1mL; W:樣本鮮重,g。
 
  注意事項
 
  1.濃硫酸具有強腐蝕性,操作時需特別注意,90℃加熱取出后冷卻再打開蓋子,以防液體飛濺。
 
  2.若吸光值超過 1,可將樣本提取液進行適當稀釋再進行測定,并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
 
  注:電子版說明書僅供參考、具體請參考試劑盒紙質(zhì)版說明書。

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