多糖-蛋白結合疫苗
結合疫苗是指采用化學方法將多糖共價結合在蛋白載體上所制備成的多糖--蛋白結合疫苗。因僅靠多糖抗原不足以提供可靠的保護，多糖僅可誘導B細胞免疫，產(chǎn)生的抗體活性弱，且無法形成免疫記憶，多糖疫苗對嬰幼兒無免疫效果。而多糖結合載體蛋白，免疫反應性質(zhì)發(fā)生轉(zhuǎn)變，可以增強免疫原性。如 B型嗜血桿菌(Hib)結合疫苗、腦膜炎球菌結合疫苗和肺炎球菌結合疫苗等，可有效誘導嬰幼兒免疫。
那么，為什么多糖與載體蛋白一定要共價結合嗎，如果是松散結合，位于同一濾泡樹突狀細胞(FDC)中，難道就不能誘導濾泡輔助T細胞(Tfh)反應嗎？
答案是不能。原因為當多糖與載體蛋白松散結合時，在FDC提呈過程中，蛋白質(zhì)和多糖無法同時被多糖特異性B細胞(BCR)結合，導致蛋白質(zhì)留存在FDC中，多糖被B細胞內(nèi)化，同樣無法被主要組織相容性復合物(MHC II)提呈于B細胞表面，多糖抗原依舊停留在B細胞內(nèi)化階段。
圖源：《Understanding Modern Vaccines:Perspectives in Vaccinology》
更好地實現(xiàn)共價結合
多糖-蛋白質(zhì)共價結合物的形成是基于蛋白質(zhì)分子中的氨基酸側鏈的自由氨基和多糖分子還原末端的羥基之間的羥氨反應，即Maillard反應。蛋白質(zhì)分子在水溶液中趨于形成各種高級結構，一些反應基團被包埋于結果內(nèi)部。而多糖由于立體效應，具體強烈的取向性。因此，蛋白質(zhì)和多糖的反應條件較為嚴苛。
反應必須在低于蛋白質(zhì)變性的溫度條件下進行的，而且反應時還需控制反應體系中的較低水分活度使得蛋白質(zhì)中的氨基處于非聚集的反應狀態(tài)。此條件下，Maillard反應速度很慢，通常需要2-3天，甚至更長。
通常操作步驟：
• 多糖預處理：降低分子量，降低粘度
• 將多糖溶解在選定的pH緩沖溶液中
• 攪拌均勻后進行冷凍干燥
加入蛋白質(zhì)，在合適的溫度(如37°C)進行長時間反應
來自 IKA 的理想答卷
有沒有這樣一款設備，既能在反應過程中監(jiān)控粘度的變化，又能測pH，還能實現(xiàn)溫控和長時間的攪拌呢?!
理想答卷
• IKA EasySyn 化學合成釜化學合成釜搭配 Starvisc 攪拌扭矩測量儀，實時顯示扭矩(對應粘度)，用扭矩值精確控制，消除批次間的差異
• Starvisc 攪拌扭矩測量儀，適合2-3天甚至是更長時間的連續(xù)、穩(wěn)定工作
• 7口釜蓋可同時集成：攪拌，溫度和pH。攪拌槳，溫度和pH均為PTFE材質(zhì)，耐化學腐蝕。
• 釜體密封性好，極限真空可達3mbar，可在釜體中實現(xiàn)真空干燥，同時隔絕污染。
• 操作安全：溫控管固定在支架上，由排氣排液閥再外接控溫，減少對夾套接頭的應力。玻璃釜體和攪拌頭調(diào)節(jié)下降終點有限位，即便調(diào)節(jié)高度時沒拿穩(wěn)，釜體也不會碰到桌面，使用更安心。
當然，為避免操作過程中帶來不必要的污染，加料可以通過蠕動泵來實現(xiàn)，直接連接到釜蓋上即可。我們還可以通過軟件實現(xiàn)條件式控制，譬如溫度和pH達到預設值后，啟動蠕動泵加料，啟動攪拌等。實驗方法和數(shù)據(jù)都可以完整記錄，分3級管理，符合國家食藥局的“藥品記錄和數(shù)據(jù)管理要求”。
免費試用
現(xiàn)在 IKA 給大家備好了1L EasySyn 化學合成釜樣機，歡迎您們申請試用。我們將按申請時間的先后順序盡快安排。
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