高通量細(xì)胞計(jì)數(shù)儀可以提供快速、簡(jiǎn)便和準(zhǔn)確的細(xì)胞計(jì)數(shù)和存活率計(jì)數(shù)，無需使用血球計(jì)數(shù)器，克服了手工計(jì)數(shù)的繁瑣和主觀性，節(jié)約實(shí)驗(yàn)時(shí)間，并能減少主觀判斷，避免產(chǎn)生錯(cuò)誤。原理：臺(tái)盼藍(lán)排斥法。正常的活細(xì)胞，胞膜結(jié)構(gòu)完整，能夠排斥臺(tái)盼藍(lán)，使之不能夠進(jìn)入胞內(nèi)；而喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞，胞膜的通透性增加，可被臺(tái)盼藍(lán)染成藍(lán)色。自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀應(yīng)用臺(tái)盼藍(lán)染色法，再結(jié)合CCD成像，快速準(zhǔn)確完成細(xì)胞計(jì)數(shù)和存活率計(jì)數(shù)。
高通量細(xì)胞計(jì)數(shù)儀是如何工作的？
開始使用流式細(xì)胞儀，準(zhǔn)備要分析的樣品。從細(xì)胞培養(yǎng)物，血液或分解的組織中獲得的細(xì)胞應(yīng)制成懸浮液。將該細(xì)胞懸浮液分成數(shù)個(gè)試管進(jìn)行染色，保留未染色細(xì)胞作為對(duì)照。通過添加標(biāo)記有熒光探針的抗體或染色細(xì)胞成分的染料對(duì)其他細(xì)胞樣品染色。分析細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)時(shí)，先將細(xì)胞固定(使用福爾馬林緩沖液)并進(jìn)行透化(使用透化劑)，以使抗體和染料進(jìn)入細(xì)胞。細(xì)胞與抗體或染料孵育后，將細(xì)胞在緩沖液中洗滌，然后重懸在基于鹽的緩沖液中進(jìn)行分析。然后將準(zhǔn)備好的樣品引入流式細(xì)胞儀。
三個(gè)主要輸出測(cè)量值是前向散射，側(cè)向散射和熒光信號(hào)。激光的可見光會(huì)反射出每個(gè)流通池，從而提供流通的尺寸和形狀特征。前向散射的前向散射(FSC)是從正方向來的散射而反射細(xì)胞的大小。沿著激光路徑測(cè)量散射，每個(gè)單元將使光圍繞單元的側(cè)面彎曲，從而引起衍射。因此，F(xiàn)SC的強(qiáng)度反映了細(xì)胞的直徑。
側(cè)面散射。該側(cè)向散射(SSC)是在90度激光束下測(cè)量的散射，反映了細(xì)胞的粒度或復(fù)雜性。細(xì)胞中的結(jié)構(gòu)將改變進(jìn)入細(xì)胞的光波的方向，從而導(dǎo)致特定的細(xì)胞結(jié)構(gòu)(例如顆粒和細(xì)胞核)折射光。SSC越強(qiáng)，折射越大，則預(yù)期單元中的粒度就越大。
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