α-酮戊二酸是微生物三羧酸循環(huán)中重要的代謝中間產物,是連接細胞內碳-氮代謝的關鍵節(jié)點,在循環(huán)中的位置位于異檸檬酸之后以及琥珀酰輔酶 A 之前。在這一部位,回補反應可以通過自谷氨酸的轉氨基作用產生α-酮戊二酸而達到補充此中間代謝產物的目 的。
α-酮戊二酸含量測定原理:
α-酮戊二酸與衍生劑反應,產生紫外下有吸收的物質,利用高效液相色譜法分離,紫 外檢測器測定其含量。
α-酮戊二酸含量測定需自備的實驗用品:
高效液相色譜儀(C18 柱,紫外檢測器)、低速離心機、超聲波清洗器、溶劑抽濾裝置、濾膜(水系和有機系各 1 個,0.45μm)、針頭式過濾器(水系,50 個,0.22μm)、可調式移液器、樣品瓶(50 個,2mL)、甲醇(色譜級)、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀和超純水。
試劑的組成和配制:
實驗前的準備工作:
α-酮戊二酸的提取:
稱取約 0.2g 樣本,放入研缽中磨碎,加入 0.2mL 預冷的試劑一,以及 0.5mL 預冷的超純水, 移入 EP 管內,4 oC 浸提 60min,10000g,4 oC 離心 10min,提取上清液。
α-酮戊二酸的衍生反應:
α-酮戊二酸含量標準品的配制:
齊一生物擁有多臺高效液相色譜儀、氣象色譜儀、液質聯動儀,可以提供完善的代測檢測服務。能為各位老師、同學提供完善的檢測服務,提供全套圖譜、原始數據和全套檢測計算過程及結果。
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