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齊一生物科技（上海）有限公司 |  資料大小 |
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土壤過(guò)氧化氫酶（Solid-Catalase，S-CAT）試劑盒說(shuō)明書
分光光度法 50 管/24 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
S-CAT是土壤微生物代謝的重要酶類，在H2O2清除系統(tǒng)中具有重要作用。
測(cè)定原理：
H2O2在 240nm下有特征吸收峰，通過(guò)測(cè)定與土壤反應(yīng)后溶液在此波長(zhǎng)下吸光度的變化，即
可反應(yīng) S-CAT活性的高低。
土壤過(guò)氧化氫酶（Solid-Catalase，S-CAT）試劑盒說(shuō)明書 需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿和蒸餾水
試劑組成和配制：
試劑一：液體 100μL×5 瓶，4℃保存；臨用前每瓶加入 9.9mL蒸餾水充分溶解后待用；用不
完的試劑 4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入 2mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑 4℃保
存；
試劑三：液體6mL×1 瓶，4℃保存。
樣品處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或 37度烘箱風(fēng)干，過(guò)30~50目篩。
測(cè)定步驟：
試劑名稱 測(cè)定管 無(wú)基質(zhì)管 無(wú)土管
風(fēng)干土樣（g） 0.1 0.1
試劑一（μL） 1000 1000
雙蒸水（μL） 1000
25℃振蕩培養(yǎng) 20min
試劑二（μL） 25 25 25
混勻 8000g，25℃離心5min，取 820μL上清
試劑三（μL） 96 96 96
混勻，用蒸餾水調(diào)零，240nm處記錄各管 A值。
土壤過(guò)氧化氫酶（Solid-Catalase，S-CAT）試劑盒說(shuō)明書 注意：每個(gè)測(cè)定管要設(shè)一個(gè)無(wú)基質(zhì)管，無(wú)土管只要做一管。
S-CAT 活性計(jì)算：
單位的定義：每天每 g風(fēng)干土樣催化 1μmol H2O2降解定義為一個(gè)酶活力單位。
計(jì)算公式：S-CAT（μmol/d/g）＝[(A 無(wú)土管-A 測(cè)定管+A 無(wú)基質(zhì)管)×V 反總÷（ε×d）
×106
]÷W÷T=18.9×（A無(wú)土管-A測(cè)定管+A無(wú)基質(zhì)管）
V反總：反應(yīng)體系總體積，1.145×10-3
L；ε：過(guò)氧化氫摩爾消光系數(shù)，4.36×104
L / mol /cm；
d：比色皿光徑，1cm； T：反應(yīng)時(shí)間，20 min=1/72d； W：樣本質(zhì)量，0.1g。
土壤過(guò)氧化氫酶（Solid-Catalase，S-CAT）試劑盒說(shuō)明書
