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微囊藻素- ADDA檢測試劑盒

概述

這個Abraxis微囊藻素 ELISA 檢測試劑盒適用于定量檢測水樣中微囊藻素和節(jié)球藻素的含量。在樣品處理的時候不需要濃縮。如果必要的話陽性樣品可以通過HPLC或其他的傳統(tǒng)的方法來驗證。

微囊藻素- ADDA檢測試劑盒安全性說明

底物溶液包含有TMB，終止液含有稀硫酸。要避免皮膚和底物溶液、終止液接觸。如果不小心接觸的話請用清水沖洗。

儲存和穩(wěn)定性

這個Abraxis 微囊藻素 ELISA 檢測試劑盒應該置于4–8°C保存。在使用前要提前拿出來回復到室溫（20-25°C）。在有效期內都可以使用。

原理

這個Abraxis微囊藻素- ADDA 檢測試劑盒的原理是直接競爭酶聯(lián)免疫反應。通過一種特異性抗體來識別檢測微囊藻素和節(jié)球藻素。當樣品中還有囊藻素和節(jié)球藻素及其類似物時，那么它們將會與固定在微孔低的微囊藻素-蛋白類似物競爭和溶液中的微囊藻素抗體結合。經(jīng)過一個洗滌步驟后加入HRP標記的二抗反應。再加入無色底物，產(chǎn)生了一個顏色反應。加入反應終止液后使顏色由藍色變?yōu)辄S色；在450nm波長進行檢測，樣品中的微囊藻素濃度與吸收光強度成反比。

微囊藻素- ADDA檢測試劑盒試劑盒的局限性和可能的交叉反應

對在水樣中經(jīng)常出現(xiàn)的多種有機物和無機物已近作過檢測對此試劑盒并無干擾。由于化合物的易變質性由基質反應引起的干擾是不可能*避免的。操作不當可能導致檢測結果錯誤，比如：試劑盒保存條件不對、錯誤的加液順序、試劑的量沒有加準確、孵育的時間太長或太短、孵育的溫度太高或太低。操作過程不易在強光下進行。和其它檢測方法一樣對陽性結果要求通過其它傳統(tǒng)的方法來驗證。

重要性

世界上大多數(shù)人都依賴表面水，因為表面水是主要的飲用水。飲用水工業(yè)面臨著表面水污染的威脅，這將導致人類的安全問題。藍綠藻屬(Cyanobacteria，Blue-green Algae)分泌產(chǎn)生的藍藻毒素是目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的污染范圍zui廣，研究zui多的一類藻毒素。目前已從不同微囊藻菌株中分離、鑒定了60多種微囊藻毒素結構。目前已知存在的zui普遍、含量相對較多，毒性較大的是主要是MC-LR，MC-RR，MC-YR等數(shù)種， 其中的微囊藻毒素LR (Microcystin-LR)是目前已知的毒性、急性危害zui大的一種淡水藍藻毒素。于未及時地檢測水質情況的污染變化及采取相應的控制措施，致使這些毒素富集于魚類或貝類中并通過食物鏈傳遞，直接存在于飲用水或用水中，嚴重威脅人類的健康，已經(jīng)發(fā)生了多起有關藻毒素中毒并引起死亡的事故。近年來淡水藻類污染已成為一個性的環(huán)境問題。

性能數(shù)據(jù)

敏感性：檢測限0.10 ppb (ng/L) 

重復性：標準的變異系數(shù)(CVs) <10%；樣品的異系數(shù)(CVs) <15%

選擇性：這個檢測方法對于藍綠藻病毒環(huán)狀多肽類似物展現(xiàn)出非常好的交叉性 

樣品：一個樣品相關性試驗被做顯示出良好的相關性（用ELISA 和PAA分別測定）。

A 試劑盒組成

1、96孔酶標板：1塊（12×8條），包被有結合了蛋白的微囊藻毒素的類似物。

2、標準溶液和對照: 標準6瓶，濃度分別為0, 0.15, 0.40, 1.0, 2.0, 5.0 ppb，對照1瓶濃度為0.75 ppb

3、抗體溶液

4、抗-羊-HRP酶標記物

5、洗液 5X Concentrate,

6、底物顯色液（TMB）

7、終止液

8、使用說明書

9、稀釋液：用于稀釋樣品（樣品濃度大于5 ppb時）

B 測試前準備

微量移液器和吸頭是必須使用的，推薦使用排槍加液這樣可以確保整個微孔板上的孔在每個步驟的反應時間趨于一致。在做同一次測試時要使用同一個盒子里的試劑和標準。在操作前仔細閱讀說明書。

1、使用前將所有的試劑拿到室溫（19℃-25℃）。

2、從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。置于4-8℃保存。

3、標準液，對照，抗體溶液，酶結合物，底物，終止液不用稀釋直接使用。

4、洗液在使用前要以1：5的比例稀釋后使用（100 mL 5X 洗液加 400 mL 無離子水）

5、由于終止液中包含稀硫酸拿的時候要小心。

C.操作步驟

1、在對應的微孔中加入50μL的標準溶液、對照或樣品（推薦做2-3個重復）。

2、每個測試孔都加入50 μL抗體溶液，用封口膜把微孔板蓋上，輕輕的震蕩微孔板30秒使里面的液體混勻。在室溫孵育90分鐘。

3、孵育完成后，將微孔中的溶液用力地倒入水槽中，用1 X的洗液洗板3次，每孔每次至少加入250 μL1 X的洗液。拍板，去掉殘留的洗液。

4、每孔加入100 μL的酶結合物溶液，用封口膜把微孔板蓋上，輕輕的震蕩微孔板30秒使里面的液體混勻。在室溫孵育30分鐘。

5、孵育完成后，將微孔中的溶液用力地倒入水槽中，用1 X的洗液洗板3次，每孔每次至少加入250 μL1 X的洗液。拍板，去掉殘留的洗液。

6、每個測試孔加入100μL的底物顯色液。室溫孵育20-30分鐘，此步驟避免太陽光照射。

7、每個測試孔加入50μL終止液。

8、在450nm 下讀取每個孔的吸光度值（OD）（在加入終止液15分鐘內完成）

微囊藻素- ADDA檢測試劑盒D 結果分析

結果分析可以利用商業(yè)ELISA分析軟件(4-parameters,Logit/Log or alternatively point to point)。手工計算可以先計算標準的吸光度值的平均值，然后計算每個標準的%B/B0（用其它標準的吸光度值除以零標準的吸光度值乘以100%）。以每個標準的%B/B0做Y軸，以每個標準的微囊藻素的濃度做X軸構建標準曲線。通過利用標準曲線，把對照和樣品的%B/B0代入標準可以計算出樣品中微囊藻素的濃度。樣品中微囊藻素的含量小于0.10 ppb認為陰性。當樣品中微囊藻素的含量大于5.0 ppb要稀釋后再測定。陽性對照測定的范圍在真實值的±25%范圍內波動。

微囊藻素- ADDA檢測試劑盒E 劑盒未提供的材料

1、50-250ul的移液器及吸頭.

2、50-250ul八道移液器及吸頭。

3、450nm的酶標儀

4、洗板機（可選）

5、震蕩器（可選）

F. 工作計劃

Std0-Sd6: 標準

PC (陽性對照 0.75 ppb

Sample1, Sample2, Sample3, etc.: Samples