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齊一生物科技(上海)有限公司www.qiyibio。。com編輯報道!
兩個或兩個以上的細胞合并成一個雙核或多核細胞的現(xiàn)象稱為細胞融合,也稱細胞雜交,在自然情況下的受精過程即屬這種現(xiàn)象。
誘導細胞融合的主要方法有:病毒誘導融合,化學融合劑誘導融合和電融合。
1. 病毒誘導融合:有許多種類的病毒能介導細胞融合,zui常用的是滅活的仙臺病毒(HVJ),為RNA病毒。病毒誘導細胞融合的過程有:首先是細胞表面吸附許多病毒粒子,接著細胞發(fā)生凝集,幾分鐘至幾十分鐘后,病毒粒子從細胞表面消失,而就在這個部位鄰接的細胞的細胞膜融合,胞漿相互交流,zui后形成融合細胞。
2. 化學融合劑誘導融合:化學融合劑主要有脂肪酸衍生物、脂質(zhì)體、鈣離子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白質(zhì)和多肽,其中zui常用的是聚已二醇(PEG)。PEG用于細胞融合至少有兩方面的作用:①可促使細胞凝結(jié);②破壞互相接觸處的細胞膜的磷脂雙分子層,從而使相互接觸的細胞膜之間發(fā)生融合,進而細胞質(zhì)溝通,形成一個打的雙核或多核融合細胞。
3. 電融合:是指細胞在電場中極化成偶極子,并沿著電力線排列成串,然后用高強度、短時程的電脈沖擊穿細胞膜而導致細胞融合。
細胞融合技術(shù)在基因定位、基因表達產(chǎn)物、腫瘤診斷核治療、生物新品種培育及單克隆抗體技術(shù)等領(lǐng)域有著非常廣泛的應用前景。單克隆抗體技術(shù)就是通過細胞融合技術(shù)發(fā)展起來的,在生命科學研究核應用方面產(chǎn)生了重大影響。
實驗操作
在公雞翼下靜脈抽取2ml雞血,加入盛有8ml的Alsever液中,使血液與Alsever液的的比例達1∶4,混勻后可在冰箱中存放一周;
取此儲存雞血0.2ml加入0.8ml的0.85%生理鹽水,充分混勻,1500r/min離心5min,棄去上清,加入1ml的0.85%生理鹽水,重復上述條件離心兩次。zui后棄去上清,加GKN液0.8ml,離心;
棄去上清,加入0.3ml的GKN溶液,制成細胞懸液;(也可以用血球計數(shù)板計數(shù),用GKN液將其調(diào)整為106個/ml);
取以上細胞懸液0.2ml放入1ml的EP管中,然后放入37℃水浴中預熱,同時將50%PEG液一并預熱20min;
20min后將0.2ml的50%PEG溶液逐滴沿離心管壁加入到0.2ml細胞懸液中,邊加邊搖勻,然后放入37℃水浴中保溫20min;
20min后,加入GKN溶液1ml,靜止于水浴中20min左右;
1500r/min離心5min,棄去上清,加GKN溶液再離心1次;
棄去上清,加入GKN液少許,混勻,取少量懸浮于載玻片上,加入詹納斯綠染液,用牙簽混勻,3min蓋上蓋玻片,觀察細胞融合情況。
融合過程
相關(guān)實驗溶液的配制
Alsever溶液:葡萄糖2.05g,檸檬酸鈉0.80g,NaCl 0.42g,溶于100ml雙蒸水中。
GKN溶液:NaCl 8g,KCl 0.4g,Na2HPO4·2H2O 1.77g,NaH2PO4·H2O 0.69g,葡萄糖2g,酚紅0.01g,溶于1000ml水中。
50%PEG溶液:稱取一定量的PEG(WM=4000)放入燒杯中,沸水浴加熱,使之熔化,待冷卻至50℃時,加入等體積預熱至50℃的GKN溶液,混勻,置37備用。