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齊一生物科技（上海）有限公司
初級(jí)會(huì)員·11年
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- 程成
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For Research Use only
僅供研究用
貨號(hào)：QYS-23098
微量法 100管/48樣
注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
原果膠含量測(cè)定意義
果膠是植物細(xì)胞壁主要組成成分之一，分為水溶性果膠和不溶性果膠，即原果膠。因其具有良好的乳化、增稠和凝膠作用，在食品、紡織、印染、煙草、
冶金等領(lǐng)域具有較廣泛的應(yīng)用。
原果膠含量測(cè)定原理
原果膠在稀酸中水解為可溶性果膠，并進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為半乳糖醛酸，產(chǎn)物在強(qiáng)酸中與咔唑縮合生成紫紅色化合物，在 530 nm 處有特征吸收峰。
原果膠含量試劑盒需自備的儀器和用品
天平、研缽、常溫離心機(jī)、水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、濃硫酸和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液一：液體 100mL×2 瓶，4℃保存。
提取液二：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1mL×1 支，4℃保存。
試劑一：濃硫酸，自備。
試劑二：液體 2mL×1 支，4℃保存。
試劑三：液體 3mL×1 瓶，4℃避光保存。
原果膠含量樣品處理
將組織樣品搗碎，按照樣品質(zhì)量(g)和提取液一體積(mL)為 1: 20 的比列(建議取約 0.05g 樣
品，加入 1mL 提取液一)，置于 90℃恒溫水浴鍋中浸提 30min，取出冷卻后于 5000g、 25℃ 離心 10min，去掉上清，沉淀中再加入 1mL 提取液一重復(fù)操作一次，離心后去上清，沉淀中加入 1mL 提取液二，置于 90℃恒溫水浴鍋中水解 1h，取出冷卻后于 8000g、25℃離心15min，取上清液待測(cè)。
原果膠含量測(cè)定操作表
詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
充分混勻，取 200μL 置于微量石英比色皿/96 孔板中，測(cè)定 530nm 處吸光值，分別記為 A1、A2、A3 和 A4。△A1=A2-A1，△A2=A4-A3
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。計(jì)算公式
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
原果膠含量(mg /g 鮮重)= (C 標(biāo)準(zhǔn)×V 標(biāo)) ×△A2÷△A1÷(W×V 樣÷V 樣總) = 0.25×△A2÷△ A1÷W
C 標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，0.25mg/mL；V 標(biāo)：反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.02mL；V 樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.02mL；V 樣總：加入提取液體積，
1mL；W：樣本鮮重，g。
b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
原果膠含量(mg /g 鮮重)= (C 標(biāo)準(zhǔn)×V 標(biāo)) ×△A2÷△A1÷(W×V 樣÷V 樣總) =0.25×△A2÷△ A1÷W
C 標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，0.25mg/mL；V 標(biāo)：反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.02mL；V 樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.02mL；V 樣總：加入提取液體積，
1mL； W：樣本鮮重，g。
注意事項(xiàng)
1.濃硫酸具有強(qiáng)腐蝕性，操作時(shí)需特別注意，90℃加熱取出后冷卻再打開(kāi)蓋子，以防液體飛濺。
2.若吸光值超過(guò) 1，可將樣本提取液進(jìn)行適當(dāng)稀釋再進(jìn)行測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
注：電子版說(shuō)明書(shū)僅供參考、具體請(qǐng)參考試劑盒紙質(zhì)版說(shuō)明書(shū)。
