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α-酮戊二酸是微生物三羧酸循環(huán)中重要的代謝中間產(chǎn)物，是連接細胞內(nèi)碳-氮代謝的關(guān)鍵節(jié)點，在循環(huán)中的位置位于異檸檬酸之后以及琥珀酰輔酶 A 之前。在這一部位，回補反應可以通過自谷氨酸的轉(zhuǎn)氨基作用產(chǎn)生α-酮戊二酸而達到補充此中間代謝產(chǎn)物的目 的。
α-酮戊二酸含量測定原理：
α-酮戊二酸與衍生劑反應，產(chǎn)生紫外下有吸收的物質(zhì)，利用高效液相色譜法分離，紫 外檢測器測定其含量。
α-酮戊二酸含量測定需自備的實驗用品：
高效液相色譜儀（C18 柱，紫外檢測器）、低速離心機、超聲波清洗器、溶劑抽濾裝置、濾膜（水系和有機系各 1 個，0.45μm）、針頭式過濾器（水系，50 個，0.22μm）、可調(diào)式移液器、樣品瓶（50 個，2mL）、甲醇（色譜級）、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀和超純水。
試劑的組成和配制：
實驗前的準備工作：
α-酮戊二酸的提取：
稱取約 0.2g 樣本，放入研缽中磨碎，加入 0.2mL 預冷的試劑一，以及 0.5mL 預冷的超純水， 移入 EP 管內(nèi)，4 oC 浸提 60min，10000g，4 oC 離心 10min，提取上清液。
α-酮戊二酸的衍生反應：
α-酮戊二酸含量標準品的配制：
齊一生物擁有多臺高效液相色譜儀、氣象色譜儀、液質(zhì)聯(lián)動儀，可以提供完善的代測檢測服務(wù)。能為各位老師、同學提供完善的檢測服務(wù)，提供全套圖譜、原始數(shù)據(jù)和全套檢測計算過程及結(jié)果。
