引言茶葉作為世界三大飲料之一，在中國及日本民間很早就有利用粗老茶治療糖尿病的經(jīng)驗。日本學(xué)者清水岑夫發(fā)現(xiàn)，茶葉中治療糖尿病的藥理成分為茶多糖，此后有關(guān)茶多糖的研究報道逐年增多。據(jù)報道，茶多糖在體外對α-淀粉酶活性具有較強的抑制作用，茶多糖降血糖機制可能與其抑制α-淀粉酶活性，從而延緩碳水化合物在小腸的吸收有關(guān)。茶多糖在烏龍茶中含量高于紅、綠茶，而且茶葉愈粗老，茶多糖含量越高。福建作為烏龍茶大省，在茶葉生產(chǎn)過程中茶梗、茶末、老葉等副產(chǎn)品未被利用，若從其中提取茶多糖作為功能因子，應(yīng)用于食品、保健品、醫(yī)藥等生產(chǎn)中，則可變廢為寶，將為烏龍茶的綜合開發(fā)開辟一條新途徑。近年來超聲波技術(shù)在植物活性物質(zhì)提取中得到較為廣泛的應(yīng)用，尤其在多糖的分離純化取得了較為理想的效果，具有操作安全簡單、污染小或無污染等特點。該研究采用超聲波技術(shù)開展烏龍茶多糖提取工藝研究，以茶多糖對α-淀粉酶活性抑制率為指標，旨在探索各工藝參數(shù)對茶多糖降血糖活性影響，并在此基礎(chǔ)上進一步對提取工藝條件進行優(yōu)化，為烏龍茶多糖的開發(fā)利用提供基礎(chǔ)資料和理論依據(jù)。
　　
　　1材料與方法1.1材料與儀器材料：鐵觀音，安溪茶葉市場購買。
　　
　　主要儀器：SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；B-490旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鄭州長城科基金項目：華僑大學(xué)引進人才啟動項目（09B0054）。
　　
　　工貿(mào)有限公司）；756型紫外可見分光光度計（上海光譜儀器有限公司）；KQ5200DE超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）主要試劑：可溶性淀粉、十二水合磷酸氫二鈉、一水合檸檬酸、無水乙醇、碘、碘化鉀、氯化氫，以上均為分析純；α-淀粉酶（2000U/g）。
　　
　　1.2試驗方法1.2.1茶多糖的提取方法準確稱取10g樣品于燒杯中，加入蒸餾水進行超聲波處理，隨即離心（4800r/min）10min，上清液轉(zhuǎn)移到布氏漏斗中抽濾，濾渣放入原燒杯中，加入同樣量的蒸餾水，按照之前的條件再超聲1次，離心（4800r/min）10min，合并2次濾液，將濾液置于圓底燒瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至原體積的20，加入無水乙醇沉淀，冰箱中靜置沉淀24h，離心（4000r/min）15min，轉(zhuǎn)移到三角漏斗中真空抽濾得到沉淀，干燥得茶多糖。
　　
　　1.2.2單因素試驗分別考察超聲時間20、30、40、50、60min，超聲功率120、140、160、180、200W，超聲溫度20、30、40、50、60℃，料水比（g：mL）1：10、1：20、1：30、1：40、1：50對烏龍茶多糖活性的影響，其他因素均取中間水平。
　　
　　1.2.3正交試驗以單因素試驗結(jié)果為基礎(chǔ)，選用正交設(shè)計表L9（34）（），以茶多糖對α-淀粉酶活性抑制率為指標，對超聲波法提取烏龍茶多糖的工藝條件進行優(yōu)化。
　　
　　1.2.4茶多糖對α-淀粉酶活性抑制率的測定方法吸取可溶性淀粉溶液20mL、pH6.0的磷酸緩沖液5mL、1mL茶多糖溶液和1mL待測酶液于試管中，搖勻于60℃準確反應(yīng)5min.立即吸取反應(yīng)液1mL，加到預(yù)先盛有0.5mL鹽酸（0.1mol/L）和5mL稀碘液的試管中，搖勻。以蒸餾水代替淀粉溶液作試劑空白調(diào)零。
　　
　　660nm處用10mm比色皿迅速測定其吸光度（A）。
　　
　　茶多糖對酶活抑制效果計算公式為：PE=（C0-C1）VE/CV………………………………（1）式中：PE為茶多糖對α-淀粉酶酶活的抑制效果（U/mg多糖），C0為未加茶多糖的酶液中α-淀粉酶的原始濃度（U/mL），C1為經(jīng)茶多糖抑制后的酶液中α-淀粉酶的濃度（U/mL），C1由測得的反應(yīng)液吸光度A據(jù)“吸光度A-酶濃度C”附錄表查得；VE為所取稀釋酶液的體積（mL），此研究取1mL；C為多糖溶液中茶多糖濃度（mg/mL）；V為加入酶液的多糖溶液的體積（mL）。
　　
　　PER=PEC0VE×100…………………………（2）式中：PER為每毫克茶多糖對α-淀粉酶酶活抑制率（），其余同上式。
　　
　　2結(jié)果與分析2.1超聲時間對烏龍茶多糖活性的影響在料水比1┱30、超聲溫度40℃、超聲功率160W條件下，超聲處理20、30、40、50、60min烏龍茶多糖活性如所示。結(jié)果表明，隨著超聲作用時間增加，茶多糖對α-淀粉酶活性抑制率增大，處理時間超過40min后茶多糖活性反而下降，超聲波空化效應(yīng)產(chǎn)生的大氣壓撞擊力長時間作用可能會使大分子多糖斷裂，從而影響了烏龍茶多糖的活性，因此超聲作用時間選擇40min為宜。
　　
　　2.2超聲功率對烏龍茶多糖活性的影響固定料水比1：30、超聲時間40min、超聲溫度40℃，分別考察超聲功率120、140、160、180、200W條件下烏龍茶多糖活性（）?？梢钥闯?，改變其超聲功率對茶多糖的活性有一定的影響，120180W范圍內(nèi)茶多糖對α-淀粉酶活性抑制率隨超聲功率加強而增大，當功率超過180W時烏龍茶多糖活性反而下降，可能是超聲功率強度過大，多糖結(jié)構(gòu)發(fā)生改變導(dǎo)致活性降低，因此超聲功率宜采用180W.
　　
　　2.3超聲溫度對烏龍茶多糖活性的影響在超聲功率160W、超聲時間40min、料水比1：30條件下，考察超聲溫度20、30、40、50、60℃對烏龍茶多水平123因素A料水比/（g：mL）1┱301┱401┱50B超聲時間/min304050C超聲功率/W160180200D超聲溫度/℃304050糖活性的影響。茶多糖對α-淀粉酶活性抑制率隨著溫度升高增大，多糖活性可能受得率限制，在30℃時達到zui大，其后多糖活性隨之增高而降低，茶多糖在高溫下容易失活，因此微波處理溫度采用30℃為宜。
　　
　　2.4料水比對烏龍茶多糖活性的影響固定超聲溫度40℃、超聲時間40min、超聲功率160W，分別考察料水比1：20、1：30、1：40、1：50、1：60條件下烏龍茶多糖活性，結(jié)果。可以看出茶多糖對α-淀粉酶活性抑制率隨著料水比的增加而增大，在料水比為1：40時烏龍茶多糖活性zui大，當料水比大于1：40活性隨之略微降低，因此1：40為zui適料水比。
　　
　　2.5正交試驗極差分析和方差分析表明，以茶多糖對α-淀粉酶活性抑制率為指標，各因素影響順序依次為：超聲溫度>超聲功率>料水比>超聲時間，各因素均對烏龍茶多糖活性有極顯著性影響（3）。極差分析得烏龍茶多糖提取*工藝為超聲溫度30℃、超聲功率180W、料水比1：40、超聲時間40min26.18，支持工藝條件優(yōu)化結(jié)果。
　　
　　3結(jié)論在超聲波技術(shù)提取烏龍茶多糖工藝中，以茶多糖對α-淀粉酶活性抑制率為指標，各因素影響大小順序為：超聲溫度>超聲功率>料水比>超聲時間，4個因素對茶多糖活性都有極顯著性影響；*提取工藝為超聲溫度30℃、超聲功率180W、料水比1：40、超聲時間40min，此條件下烏龍茶多糖對α-淀粉酶活性的抑制率為26.18.
　　
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　　該研究系統(tǒng)研究提取工藝條件對烏龍茶多糖藥理活性的影響，這對于有效開發(fā)利用植物資源提供了一條全新的思路，突破了目前研究集中于工藝條件對活性物質(zhì)得率影響的局限，對于提高保健產(chǎn)品的品質(zhì)和療效具有推動作用。