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提及外泌體的質量分析,大家耳熟能詳?shù)氖?MISEV2018 指南要求的外泌體經(jīng)典三部曲表征,即形貌、粒徑和標志蛋白。
為什么要對外泌體進行鑒定
外泌體來源于所有生物流體。生物流體含有諸如AGO2、微生物、脂蛋白等多種復雜污染源,目前沒有任何一種公認 的分離方法可以將其嚴格去除。
相同純化工藝但不同生產過程得到的外泌體產物,其組成和比例均可能存在差異,因此有必要對每一批次的外泌體進行表征。
為了提高實驗的可重復性,確定特定的分子標志物或者生物學功能實現(xiàn)自外泌體,因此有必要在實驗前對外泌體進行“身份確認”。
經(jīng)典三部曲鑒定的局限性
經(jīng)典三部曲鑒定只局限于證實分離得到的組分中確實含有外泌體,除此之外:
• 有無其他成分?具體占比是多少?
• 不同批次之間的外泌體一致性如何?
• 工程化改造后目的成分含有多少?
• 研究和藥物申報的質量檢測是否一致?
• 既然外泌體質量檢測目前無標準,我們又如何做全面的質量檢測呢?
• 全面的質量檢測應該包含哪些?
外泌體顆粒分析的難題
納米顆粒示蹤技術(NTA)、動態(tài)光散射技術(DLS)和納米流式技術已經(jīng)被廣泛的應用于外泌體的顆粒分析。在我們已經(jīng)擁有了種類繁多的外泌體顆粒分析手段的今天,仍有一些尚未攻克的難題制約著外泌體的粒徑分布與顆粒濃度的表征,進而制約著外泌體研究和產業(yè)化的發(fā)展。
盡管由學術團體牽頭發(fā)表的外泌體指導意見在規(guī)范外泌體學術研究方面起到指明燈作用,然而鮮見外泌體在產業(yè)界的指導規(guī)范。經(jīng)典外泌體鑒定三部曲的局限性不容忽視,能適配企業(yè)生產需求的更全面和嚴格的外泌體質控標準據(jù)亟需建立。
即便是相同生產條件,利用外泌體的粒徑、密度、標志物等不同特性從體系中分離出來的外泌體在粒徑、濃度、組分比例等方面仍有較大差異。
顆粒分析設備取樣時的代表性不足、外泌體的聚沉、反復凍融及儀器檢測前處理過程等因素均可能造成同一樣品濃度檢測的重復性低。外泌體濃度定量重復性低的問題嚴重影響了后續(xù)的功能學研究。
常規(guī)的外泌體純化方法——超速離心法的巨大剪切力不可避免地對外泌體造成破壞。同時,外泌體生產過程的低產量、純化時的低回收率、凍存過程的損耗等因素共同導致了外泌體樣本少而珍貴。這就對樣本需求量更小的顆粒分析方法提出了要求。
為了深入探討和解決這些問題,9月20日14:00,《EV破冰•揭“泌”外泌體大體積分離和質量檢測新方案》第二期直播活動將由HORIBA與恩澤康泰聯(lián)合推出——《全面質量分析揭開外泌體神秘面紗》,本期雙方將為您重點解讀外泌體研究及藥物申報中的質量檢測、外泌體顆粒表征的難點與解決方案等,歡迎大家準時收看!

北京恩澤康泰生物科技有限公司是致力于外泌體技術開發(fā)與臨床轉化的創(chuàng)新型高科技公司。公司深耕外泌體研究10 余年,尤其將外泌體基礎研究與分子生物學、細胞生物學及生物信息學相結合,建立了外泌體研究與轉化平臺,并與國內200+ 重點醫(yī)院建立合作,合作發(fā)表論文100+ ,目前累計獲得多輪數(shù)億元融資。

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