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PCR實驗室污染事件處理!你可能缺少它?。。?/h1>
時間:2022/3/4
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PCR實驗室污染事件處理!你可能缺少它?。?!


今天我想跟大家分享一個發(fā)生在實驗室的核酸污染案例,從發(fā)現(xiàn)污染到處理的全過程。

核酸污染不能避免

核酸檢測實驗室的污染想全部避免是不可能的,我們能做的是隨時隨地保持警惕,盡早發(fā)現(xiàn),及時處置,盡量減少損失。

一天,一次PCR實驗中檢測員發(fā)現(xiàn)雖然陰性對照成立,但是4份陰性樣品都出現(xiàn)了擴增曲線。可以說實驗中肯定發(fā)生了污,但是污染是從何時開始的?污染源是什么?試驗被影響到的有多少?我們需要一一排查。
仔細排查和清潔


1.實驗活動全部停止,查看當天所有的試驗結果,發(fā)現(xiàn)受到污染的只有一個實驗


2.開封的劑耗材全部清理包括試劑準備區(qū)、核樣本制備區(qū)和擴增區(qū)


3.試管架、離心管架等可重復使用的物品浸泡到84消毒液中過夜,直到第二天用清水清洗晾曬后使用,注意一定要曬干;


4.酒精核酸提取儀內部、移液器內外表面,再用核酸去除劑擦拭,同時啟用備用的移液器;


5.用酒精對各區(qū)的生物安全柜、潔凈工作臺和實驗臺面拭后,再用核酸去除劑擦拭;


6.用84消毒液對實驗室地面進行清潔;


7.開窗,通風排氣。



在這里,我要推薦一下博科核酸清除劑

適用于PCR實驗室儀器、耗材和空氣氣溶膠等的核酸清除,可有效降低環(huán)境中核酸污染對PCR實驗準確性的干擾。

污染清除的實驗驗證
1.開蓋裝有PBS的離心管放置在試劑準備區(qū)的潔凈工作臺面、核酸提取儀內部、擴增區(qū)臺面樣本制備區(qū)的生物安全柜內部,過夜;
潔凈工作臺面

生物安全柜內部


核酸提取儀內部
擴增區(qū)臺面
2.在實驗臺面、生物安全柜臺面和潔凈工作臺面用采樣拭子蘸PBS反復擦拭后,放入PBS中進行洗脫。

生物安全柜臺面取樣


取樣后洗脫

3.用采樣拭子蘸PBS后對移液器的內外表面進行取樣,取樣后放入PBS中進行洗脫。

移液器內表面取樣

4.將配液的移液器和加模板的移液器換上無濾芯槍頭,在PBS中反復吹吸10次,測試移液器內部是否存在污染。


測試配液的移液器

測試結果


1.測試結果發(fā)現(xiàn)樣本制備區(qū)的生物安全柜內加模板的移液器內外表面擦拭拭子為核酸陽性,其他檢測都是陰性。

實驗室污染測試結果
2.對樣本制備區(qū)的生物安全柜內加模板的移液器進行清潔和擦拭后,第二天對該移液器內表面和外表面擦拭拭子進行檢測,仍有擴增分別為39.89和39.63。
3.對樣本制備區(qū)的生物安全柜內加模板的移液器進行清潔和擦拭后,過二天后對該移液器內表面和外表面擦拭拭子進行檢測,檢測結果為陰性。
移液器污染測試結果
持續(xù)監(jiān)測

本次污染事件中從發(fā)現(xiàn)到清理測試后,*恢復了實驗活動。雖然可以確定的是樣本制備區(qū)的生物安全柜內加模板的移液器發(fā)生了污染。但是由于可能造成污染的因素很多,移液器是否是污染因素我們很難確定。后續(xù)的幾天仍然在檢測中增加陰性對照,持續(xù)對環(huán)境等樣品進行監(jiān)測,確保污染被*清除。

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10-30℃的環(huán)境下可保存6個月



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